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 2 、 丫 啶 橙 （ A O ） 染 色 ， 荧 光 显 微 镜 观 察 ： 活 细 胞 核 呈 黄 绿 色 荧 光 ， 胞 质 呈 红 色 荧 光 。 
 凋 亡 细 胞 核 染 色 质 呈 黄 绿 色 浓 聚 在 核 膜 内 侧 ， 可 见 细 胞 膜 呈 泡 状 膨 出 及 凋 亡 小 体 。 
 3 、 台 盼 蓝 染 色 ： 如 果 细 胞 膜 不 完 整 、 破 裂 ， 台 盼 蓝 染 料 进 入 细 胞 ， 细 胞 变 蓝 ， 即 为 坏 死 。 
 如 果 细 胞 膜 完 整 ， 细 胞 不 为 台 盼 蓝 染 色 ， 则 为 正 常 细 胞 或 凋 亡 细 胞 。 
 此 方 法 对 反 映 细 胞 膜 的 完 整 性 ， 区 别 坏 死 细 胞 有 一 定 的 帮 助 。 
 4 、 透 射 电 镜 观 察 ： 可 见 凋 亡 细 胞 表 面 微 绒 毛 消 失 ， 核 染 色 质 固 缩 、 边 集 ， 常 呈 新 月 形 ， 核 膜 皱 褶 ， 胞 质 紧 实 ， 细 胞 器 集 中 ， 胞 膜 起 泡 或 出 “ 芽 ” 及 凋 亡 小 体 和 凋 亡 小 体 被 临 近 巨 噬 细 胞 吞 噬 现 象 。 
 二 、 D N A 凝 胶 电 泳         （ 一 ） 、 检 测 原 理 细 胞 发 生 凋 亡 或 坏 死 ， 其 细 胞 D N A 均 发 生 断 裂 ， 细 胞 内 小 分 子 量 D N A 片 断 增 加 ， 高 分 子 D N A 减 少 ， 胞 质 内 出 现 D N A 片 断 。 
 但 凋 亡 细 胞 D N A 断 裂 点 均 有 规 律 的 发 生 在 核 小 体 之 间 ， 出 现 1 8 0 － 2 0 0 b p D N A 片 断 ， 而 坏 死 细 胞 的 D N A 断 裂 点 为 无 特 征 的 杂 乱 片 断 ， 利 用 此 特 征 可 以 确 定 群 体 细 胞 的 死 亡 ， 并 可 与 坏 死 细 胞 区 别 。 
 （ 二 ） 结 果 判 断 正 常 活 细 胞 D N A 电 泳 出 现 阶 梯 状 （ L A D D E R ） 条 带 ； 坏 死 细 胞 D N A 电 泳 类 似 血 抹 片 时 的 连 续 性 条 带 。 
 三 、 酶 联 免 疫 吸 附 法 （ E L I S A ） 核 小 体 测 定 凋 亡 细 胞 的 D N A 断 裂 使 细 胞 质 内 出 现 核 小 体 。 
 核 小 体 由 组 蛋 白 及 其 伴 随 的 D N A 片 断 组 成 ， 可 由 E L I S A 法 检 测 。 
 （ 一 ） 检 测 步 骤 1 、 将 凋 亡 细 胞 裂 解 后 高 速 离 心 ， 其 上 清 液 中 含 有 核 小 体 ； 2 、 在 微 定 量 板 上 吸 附 组 蛋 白 体 ’ 3 、 加 上 清 夜 使 抗 组 蛋 白 抗 体 与 核 小 体 上 的 组 蛋 白 结 合 ‘ 4 、 加 辣 过 氧 化 物 酶 标 记 的 抗 D N A 抗 体 使 之 与 核 小 体 上 的 D N A 结 合 ’ 4 、 加 酶 的 底 物 ， 测 光 吸 收 制 。 
 （ 二 ） 用 途 该 法 敏 感 性 高 ， 可 检 测 5 * 1 0 0 / m l 个 凋 亡 细 胞 。 
 可 用 于 人 、 大 鼠 、 小 鼠 的 凋 亡 检 测 。 
 四 、 流 式 细 胞 仪 定 量 分 析 （ 一 ） 检 测 原 理 细 胞 发 生 凋 亡 时 ， 其 细 胞 膜 的 通 透 性 也 增 加 ， 但 是 其 程 度 介 于 正 常 细 胞 与 坏 死 细 胞 之 间 。 
 （ 二 ） 应 用 价 值 流 式 细 胞 仪 检 测 具 有 以 下 特 点 ： 1 ） 、 检 测 的 细 胞 数 量 大 ， 因 此 其 反 映 群 体 细 胞 的 凋 亡 状 态 比 较 准 确 2 ） 、 可 以 做 许 多 相 关 性 分 析 3 ） 、 结 合 被 检 测 细 胞 的 D N A 含 量 的 分 析 ， 可 确 定 凋 亡 的 细 胞 所 处 的 细 胞 周 期 检 测 形 态 学 及 细 胞 膜 完 整 性 的 H o e c h s P I 双 染 色 法 细 胞 发 生 凋 亡 时 ， 其 细 胞 膜 的 通 透 性 液 增 加 ， 但 其 程 度 介 于 正 常 细 胞 和 坏 死 细 胞 之 间 ， 利 用 这 一 特 点 ， 被 检 测 细 胞 悬 液 用 荧 光 素 染 色 ， 利 用 流 式 细 胞 仪 检 测 细 胞 悬 液 中 细 胞 荧 光 强 度 来 区 分 正 常 细 胞 、 坏 死 细 胞 和 凋 亡 细 胞 。 
 D N A 片 断 原 位 标 记 法 凋 亡 细 胞 D N A 片 断 原 位 末 端 检 测 技 术 是 指 在 细 胞 （ 或 组 织 ） 结 构 保 持 不 变 的 情 况 下 ， 用 荧 光 素 、 生 物 素 标 记 的 脱 氧 尿 三 磷 酸 （ d e o x y u r i d i n e t r i p h a t e ， D U T P ） 和 末 端 脱 氧 核 苷 酸 转 移 酶 （ T d T ） 相 反 应 与 凋 亡 细 胞 裂 解 后 3 · 的 羟 基 （ － O H ） 端 结 合 ， 经 显 色 反 应 后 检 测 D N A 裂 解 点 的 技 术 。 
 D N A 片 段 原 位 标 记 法 有 二 种 ： 1 、 原 位 缺 口 转 移 （ i n s i t u n i c k t r a n s l a t i o n , I S N T ） 技 术 ， 它 是 利 用 D N A 多 聚 酶 I 将 标 记 的 核 苷 酸 连 接 到 断 裂 D N A 的 3 · － O H 端 2 、 原 位 缺 口 末 端 标 记 技 术 （ i n s i t u e n d l a b e l l i n g t e c h n i q u e , I S E L ） ， 即 T U N E L 法 ， 它 是 利 用 T d T 将 标 记 的 D U P T 接 到 3 · O H 端 。 
 研 究 证 明 ， T U N E L 法 的 敏 感 性 远 高 于 I S N T ， 尤 其 对 早 期 凋 亡 的 检 测 ， T U N E L 更 为 合 适 。 
 检 测 细 胞 膜 成 分 变 化 的 A n n e x i n V 联 合 P I 法 ： 1 、 原 理 ： 在 细 胞 凋 亡 早 期 位 于 细 胞 膜 内 侧 的 磷 脂 酰 丝 氨 酸 （ P S ） 迁 移 至 细 胞 膜 外 测 。 
 磷 脂 结 合 蛋 白 V （ A n n e x i n V ） 是 一 种 钙 依 赖 性 的 磷 脂 结 合 蛋 白 ， 它 于 P S 具 有 高 度 的 结 合 力 。 
 因 此 ， A n n e x i n V 可 以 作 为 探 针 检 测 暴 露 在 细 胞 外 测 的 磷 脂 酰 丝 氨 酸 。 
 故 利 用 对 P S 有 高 度 亲 和 力 的 A n n e x i n V ， 将 A n n e x i n V 标 记 上 荧 光 素 （ 如 异 硫 氰 酸 荧 光 素 F I T C ） ， 同 时 结 合 使 用 P I 拒 染 法 （ 因 坏 死 细 胞 P S 亦 暴 露 于 细 胞 膜 外 测 ， 且 对 P I 高 染 ） 进 行 凋 亡 细 胞 双 染 法 后 用 流 式 细 胞 仪 即 可 检 测 凋 亡 细 胞 。 
 2 、 结 果 判 断 ： 正 常 活 细 胞 A n n e x i n V 、 P I 均 低 染 ； 凋 亡 细 胞 A n n e x i n V 高 染 、 P I 低 染 ； 坏 死 细 胞 A n n e x i n V / P I 均 高 染 。 
 3 、 应 用 价 值 ： 细 胞 发 生 凋 亡 时 ， 膜 上 的 P S 外 露 早 于 D N A 断 裂 发 生 ， 因 此 A n n e x i n V 联 合 P I 染 色 法 检 测 早 期 细 胞 凋 亡 较 T U N E L 法 更 为 灵 敏 。 
 又 A n n e x i n V 联 合 P I 染 色 不 需 固 定 细 胞 ， 可 避 免 P I 染 色 因 固 定 造 成 的 细 胞 碎 片 过 多 及 T U N E L 法 因 固 定 出 现 的 D N A 片 段 丢 失 。 
 . . . 查 看 详 细 方 案 > > 总 结 E L I S A 加 样 方 法 技 巧 在 E L I S A 中 除 了 包 被 外 ， 一 般 需 进 行 4 5 次 加 样 。 
 在 定 性 测 定 中 有 时 不 强 调 加 样 量 的 准 确 性 ， 例 如 规 定 为 加 样 一 滴 。 
 此 时 应 该 使 用 相 同 口 径 的 滴 管 ， 保 持 准 确 的 加 样 姿 势 ， 使 每 滴 液 体 的 体 积 基 本 相 同 。 
 在 定 量 测 定 中 则 加 样 量 应 力 求 准 确 。 
 标 本 和 结 合 物 的 稀 释 液 应 按 规 定 配 制 。 
 加 样 时 应 将 液 体 加 在 孔 底 ， 避 免 加 在 孔 壁 上 部 ， 并 注 意 不 可 出 现 气 泡 。 
 E L I S A 中 加 样 须 注 意 如 下 问 题 ： 1 . 吸 取 样 品 时 ， 加 样 枪 吸 头 不 应 黏 附 多 余 的 液 体 ; 加 样 时 不 可 9 0 度 向 孔 中 滴 加 液 体 ， 这 样 会 导 致 液 体 残 留 在 吸 头 上 ， 加 样 不 准 确 ! 2 . 不 要 将 吸 头 伸 入 孔 中 ， 一 方 面 若 接 触 孔 底 可 能 压 弯 吸 头 ， 另 一 方 面 可 能 会 将 孔 中 的 液 体 吹 起 来 ， 加 样 不 准 确 ! 正 确 的 加 样 方 法 应 为 4 5 度 ， 吸 头 贴 着 孔 壁 加 入 ， 应 注 意 ： 1 . 角 度 太 小 ， 会 使 液 体 残 留 在 孔 壁 上 ， 导 致 加 样 不 准 确 ! 2 . 吸 头 应 当 贴 着 管 壁 和 液 面 的 交 界 处 。 
 . . . 查 看 详 细 方 案 > > E L I S A 试 剂 盒 的 测 试 要 求 在 E L I S A 中 ， 进 行 各 项 实 验 条 件 的 选 择 是 很 重 要 的 ， 其 中 包 括 : ( 1 ) 固 相 载 体 的 选 择 ： 许 多 物 质 可 作 为 固 相 载 体 ， 如 聚 氯 乙 烯 、 聚 苯 乙 烯 、 聚 丙 酰 胺 和 纤 维 素 等 。 
 其 形 式 可 以 是 凹 孔 平 板 、 试 管 、 珠 粒 等 。 
 目 前 常 用 的 是 4 0 孔 聚 苯 乙 烯 凹 孔 板 。 
 不 管 何 种 载 体 ， 在 使 用 前 均 可 进 行 筛 选 ： 用 等 量 抗 原 包 被 ， 在 同 一 实 验 条 件 下 进 行 反 应 ， 观 察 其 显 色 反 应 是 否 均 一 性 ， 据 此 判 明 其 吸 附 性 能 是 否 良 好 。 
 ( 2 ) 包 被 抗 体 ( 或 抗 原 ) 的 选 择 ： 将 抗 体 ( 或 抗 原 ) 吸 附 在 固 相 载 体 表 面 时 ， 要 求 纯 度 要 好 , 吸 附 时 一 般 要 求 P H 在 9 . 0 ～ 9 . 6 之 间 。 
 吸 附 温 度 ， 时 间 及 其 蛋 白 量 也 有 一 定 影 响 , 一 般 多 采 用 4 ℃ 1 8 ～ 2 4 小 时 。 
 蛋 白 质 包 被 的 适 合 浓 度 需 进 行 滴 定 ： 即 用 不 同 的 蛋 白 质 浓 度 ( 0 . 1 、 1 . 0 和 1 0 μ g / m l 等 ) 进 行 包 被 后 ， 在 其 它 试 验 条 件 相 同 时 ， 观 察 阳 性 标 本 的 O D 值 。 
 选 择 O D 值 大 而 蛋 白 量 少 的 浓 度 。 
 对 于 多 数 蛋 白 质 来 说 通 常 为 1 ～ 1 0 μ g / m l 。 
 ( 3 ) 酶 标 记 抗 体 工 作 浓 度 的 选 择 ： 首 先 用 直 接 E L I S A 法 进 行 初 步 效 价 的 滴 定 ( 见 酶 标 记 抗 体 部 份 ) 。 
 然 后 再 固 定 其 它 条 件 或 采 取 “ 方 阵 法 ( 包 被 物 、 待 检 样 品 的 参 考 品 及 酶 标 记 抗 体 分 别 为 不 同 的 稀 释 度 ) 在 正 式 实 验 系 统 里 准 确 地 滴 定 其 工 作 浓 度 。 
 ( 4 ) 酶 的 底 物 及 供 氢 体 的 选 择 ： 对 供 氢 体 的 选 择 要 求 是 价 廉 、 安 全 、 有 明 显 地 显 色 反 应 ， 而 本 身 无 色 。 
 有 些 供 氢 体 ( 如 O P D 等 ) 有 潜 在 的 致 癌 作 用 ， 应 注 意 防 护 。 
 有 条 件 者 应 使 用 不 致 癌 、 灵 敏 度 高 的 供 氢 体 ， 如 T M B 和 A B T S 是 目 前 较 为 满 意 的 供 氢 体 。 
 底 物 作 用 一 段 时 间 后 ， 应 加 入 强 酸 或 强 碱 以 终 止 反 应 。 
 通 常 底 物 作 用 时 间 ， 以 1 0 3 0 分 钟 为 宜 。 
 底 物 使 用 液 需 要 新 鲜 配 制 ， 尤 其 是 H 2 O 2 在 临 用 前 加 入 。 
 . . . 查 看 详 细 方 案 > > 如 何 保 证 E L I S A 试 剂 盒 的 产 品 质 量 和 使 用 质 量 对 于 实 验 室 科 研 工 作 者 来 说 ， 产 品 的 质 量 是 广 大 实 验 者 非 常 关 注 的 一 个 重 要 问 题 ， 这 是 影 响 实 验 结 果 的 一 大 因 素 。 
 产 品 质 量 来 源 于 生 产 厂 家 ， 实 验 的 质 量 就 是 与 实 验 操 作 者 有 很 大 的 关 系 了 ， 那 么 如 何 保 证 E L I S A 试 剂 盒 的 产 品 质 量 与 使 用 质 量 。 
 E L I S A 试 剂 盒 诊 断 试 剂 经 历 了 从 合 成 肽 向 工 程 抗 原 的 过 渡 。 
 由 于 历 史 的 原 因 ， 人 们 往 往 以 反 应 本 底 的 好 坏 来 衡 量 E L I S A 反 应 试 剂 盒 ， 酶 免 E L I S A 试 剂 盒 ， 其 产 品 质 量 优 势 表 现 在 ： 1 . 洁 净 的 生 产 环 境 及 科 学 的 生 产 操 控 规 程 ， 保 证 了 每 个 品 种 不 同 批 次 产 品 质 量 的 稳 定 性 。 
 2 . 原 料 ： 我 公 司 采 用 品 质 有 保 证 的 试 剂 盒 生 产 商 的 抗 体 作 为 原 料 。 
 我 们 的 其 它 辅 料 除 一 些 盐 外 ， 其 余 生 物 活 性 原 料 均 为 原 装 。 
 与 其 它 生 产 商 相 比 ， 检 测 抗 体 和 H R P 酶 我 公 司 产 品 中 提 供 直 接 的 稀 释 液 ， 直 接 加 样 ， 免 去 了 客 户 自 己 从 高 浓 度 向 低 浓 度 稀 释 ； 底 物 部 分 ， 我 公 司 E L I S A 试 剂 盒 产 品 中 配 置 进 口 单 组 分 T M B ， 免 去 客 户 用 双 组 分 时 用 前 的 混 合 步 骤 。 
 我 公 司 提 供 的 E L I S A 试 剂 盒 样 本 稀 释 液 可 有 效 消 除 血 清 中 某 些 成 份 的 影 响 ， 准 确 度 高 。 
 板 内 误 差 和 板 间 误 差 在 5 % 之 内 。 
 酶 免 E L I S A 提 醒 您 ： 保 证 实 验 质 量 ， 您 需 注 意 的 事 项 有 ： 1 . 合 理 安 排 检 测 量 ， 以 免 反 应 板 过 多 造 成 洗 板 等 待 时 间 长 。 
 2 . 显 色 剂 尽 量 在 临 用 前 配 制 ， 坚 持 不 用 过 期 显 色 剂 ， 肉 眼 可 见 浅 蓝 色 的 T M B 显 色 剂 不 用 。 
 3 . 加 样 时 保 持 显 色 剂 不 外 流 ; A 、 B 液 应 避 免 接 触 金 属 器 械 。 
 加 终 止 液 时 应 避 免 产 生 气 泡 。 
 4 . 加 酶 E L I S A 试 剂 盒 后 用 吸 水 纸 在 酶 标 板 表 面 轻 拭 吸 干 。 
 显 色 和 比 色 在 E L I S A 试 剂 盒 实 验 中 的 影 响 E L I S A 试 剂 盒 有 着 准 确 性 高 、 灵 敏 度 高 、 特 异 性 强 等 很 多 的 优 点 ， 它 在 检 测 抗 体 、 抗 原 等 方 面 有 很 好 的 应 用 ， 深 受 广 大 用 户 朋 友 的 喜 爱 。 
 然 而 ， 在 实 验 过 程 中 ， 也 需 要 注 意 很 多 问 题 ， 特 别 是 显 色 、 比 色 问 题 。 
 E L I S A 知 识 要 点 显 色 和 比 色 分 析   ： 显 色   显 色 是 E L I S A 中 的 后 一 步 温 育 反 应 ， 此 时 酶 催 化 无 色 的 底 物 生 成 有 色 的 产 物 。 
 反 应 的 温 度 和 时 间 仍 是 影 响 显 色 的 因 素 。 
 在 规 定 时 间 内 ， 阴 性 孔 可 保 持 无 色 ， 而 阳 性 孔 则 随 时 间 的 延 长 而 呈 色 加 强 。 
 适 当 提 高 温 度 有 助 于 加 速 显 色 进 行 。 
 在 定 量 测 定 中 ， 加 入 底 物 后 的 反 应 温 度 和 时 间 应 按 规 定 力 求 准 确 。 
 定 性 测 定 的 显 色 可 在 室 温 进 行 ， 时 间 一 般 不 需 要 严 格 控 制 ， 有 时 可 根 据 阳 性 对 照 孔 和 阴 性 对 照 孔 的 显 色 情 况 适 当 缩 短 或 延 长 反 应 时 间 ， 及 时 判 断 。 
 O P D （ 邻 苯 二 胺 ） 底 物 显 色 一 般 在 室 外 温 或 3 7 ℃ 反 应 2 0 3 0 分 钟 后 即 不 再 加 深 ， 再 延 长 反 应 时 间 ， 可 使 本 底 值 增 高 。 
 O P D 底 物 液 受 光 照 会 自 行 变 色 ， 显 色 反 应 应 避 光 进 行 ， E L I S A 试 剂 盒 显 色 反 应 结 束 时 加 入 终 止 液 终 止 反 应 。 
 O P D 产 物 用 硫 酸 终 止 后 ， 显 色 由 橙 黄 色 转 向 棕 黄 色 。 
 T M B （ 四 甲 基 联 苯 胺 ） 受 光 照 的 影 响 不 大 ， 可 在 室 温 中 置 于 操 作 台 上 ， 边 反 应 观 察 结 果 。 
 但 为 保 证 实 验 结 果 的 稳 定 性 ， 宜 在 规 定 的 适 当 时 间 阅 读 结 果 。 
 T M B 经 H R P 作 用 后 ， 约 4 0 分 钟 显 色 达 顶 峰 ， 随 即 逐 渐 减 弱 ， 至 2 小 时 后 即 可 完 全 消 退 至 无 色 。 
 T M B 的 终 止 液 有 多 种 ， 叠 氮 钠 和 十 二 烷 基 硫 酸 钠 （ S D S ） 等 酶 抑 制 剂 均 可 使 反 应 终 止 。 
 这 类 终 止 剂 尚 能 使 蓝 色 维 持 较 长 时 间 （ 1 2 2 4 小 时 ） 不 褪 ， 是 目 视 判 断 的 良 好 终 止 剂 。 
 此 外 ， 各 类 酸 性 终 止 液 则 会 使 蓝 色 转 变 成 黄 色 ， 此 时 可 用 特 定 的 波 长 （ 4 5 0 n m ） 测 读 吸 光 值 。 
 比 色   比 色 前 应 先 用 洁 净 的 吸 水 纸 拭 干 板 底 附 着 的 液 体 ， 然 后 将 板 正 确 放 入 酶 标 比 色 仪 的 比 色 架 中 。 
 以 软 板 为 载 体 的 试 验 ， 需 先 将 板 置 于 标 准 9 6 孔 的 座 架 中 ， 才 可 进 行 比 色 。 
 在 加 底 物 液 显 色 前 ， 先 将 软 板 边 缘 剪 净 ， 这 样 ， 此 板 就 可 完 全 平 妥 坐 入 座 架 中 。 
 比 色 时 应 先 以 蒸 馏 水 校 零 点 ， 测 读 底 物 孔 （ 未 经 任 何 反 应 仅 加 底 物 液 的 孔 ） 和 空 白 孔 （ 以 生 理 盐 水 或 稀 释 液 代 替 标 本 作 全 过 程 的 孔 ） ， 以 记 录 本 次 试 验 的 试 剂 状 况 。 
 其 后 可 用 空 白 孔 以 蒸 馏 水 校 零 点 ， 以 上 各 孔 的 吸 光 度 需 减 去 空 白 孔 的 吸 光 度 ， 然 后 进 行 计 算 。 
 比 色 结 果 的 表 达 以 往 通 用 光 密 度 （ o p l i c a l d e n s i t y ， O D ） ， 现 按 规 定 用 吸 光 度 （ a b s o r b e n c e ， A ） ， 两 者 含 义 相 同 。 
 通 常 的 表 示 方 法 是 ， 将 吸 收 波 长 写 于 A 字 母 的 右 下 角 ， 如 O P D 的 吸 收 波 长 为 4 9 2 n m ， 表 示 方 法 为 “ A 4 9 2 n m 或 “ O D 4 9 2 n m 。 
 酶 标 比 色 仪 酶 标 比 色 仪 简 称 酶 标 仪 ， 通 常 指 专 用 于 测 读 E L I S A 结 果 吸 光 度 的 光 度 计 。 
 针 对 固 相 载 体 形 式 的 不 同 ， 各 有 特 制 的 适 用 于 板 、 珠 和 小 试 管 的 设 计 。 
 许 多 试 剂 公 司 配 套 供 应 酶 标 仪 。 
 酶 标 仪 的 主 要 性 能 指 标 有 ： 测 读 速 度 、 读 数 的 准 确 性 、 重 复 性 、 精 确 度 和 可 测 范 围 、 线 性 等 等 。 
 优 良 的 酶 标 仪 的 读 数 一 般 可 精 确 到 0 . 0 0 1 ， 准 确 性 为 ± 1 % ， 重 复 性 达 0 . 5 % 。 
 举 例 说 ， 若 某 孔 测 得 的 A 值 为 1 . 0 8 3 ， 则 该 孔 相 对 于 空 气 的 真 实 A 值 应 为 1 . 0 8 3 ± 0 . 0 1 ( 1 . 0 7 3 ～ 1 . 0 9 3 ) ， 重 复 测 定 数 次 ， 其 A 值 均 应 1 . 0 8 3 ± 0 . 0 5 （ 1 . 0 7 8 ～ 1 . 0 8 8 ） 在 之 间 。 
 酶 标 仪 的 可 测 范 围 视 各 酶 标 仪 的 性 能 而 不 同 。 
 普 通 的 酶 标 仪 在 0 . 0 0 0 ～ 2 . 0 0 0 ， 新 型 号 的 酶 标 仪 上 限 拓 宽 达 2 . 9 0 0 ， 甚 至 更 高 。 
 超 出 可 测 上 限 的 A 值 常 以 “ * 或 “ o v e r 或 其 它 符 号 表 示 。 
 应 注 意 可 测 范 围 与 线 性 范 围 的 不 同 ， 线 性 范 围 常 小 于 可 测 范 围 ， 比 如 某 一 酶 标 仪 的 可 测 范 围 为 0 . 0 0 0 ～ 2 . 9 0 0 ， 而 其 线 性 范 围 仅 0 . 0 0 0 ～ 2 . 0 0 0 ， 这 在 定 量 E L I S A 中 制 作 标 准 曲 线 时 应 予 注 意 。 
 酶 标 仪 不 应 安 置 在 阳 光 或 强 光 照 射 下 ， 操 作 时 室 温 宜 在 1 5 3 0 ℃ ， 使 用 前 先 预 热 仪 器 1 5 3 0 分 钟 ， 测 读 结 果 更 稳 定 。 
 测 读 A 值 时 ， 要 选 用 产 物 的 敏 感 吸 收 峰 ， 如 O P D 用 4 9 2 n m 波 长 。 
 E L I S A 试 剂 盒 有 的 酶 标 仪 可 用 双 波 长 式 测 读 ， 即 每 孔 先 后 测 读 两 次 ， 首 先 一 次 在 最 适 波 长 （ W 1 ） ， 然 后 二 次 在 不 敏 感 波 长 （ W 2 ） ， 两 次 测 定 间 不 移 动 E L I S A 板 的 位 置 。 
 例 如 O P D 用 4 9 2 n m 为 W 1 ， 6 3 0 n m 为 W 2 ， 最 终 测 得 的 A 值 为 两 者 之 差 （ W 1 W 2 ） 。 
 双 波 长 式 测 读 可 减 少 由 容 器 上 的 划 痕 或 指 印 等 造 成 的 光 干 扰 。 
 P e p r o T e c h 细 胞 因 子 溶 解 / 储 存 和 分 装 方 法 P e p r o T e c h 细 胞 因 子 中 不 含 载 体 蛋 白 （ C a r r i e r P r o t e i n ） 或 其 他 添 加 剂 （ 如 B S A 、 H A S 或 蔗 糖 等 ） ， 并 且 通 常 以 少 量 的 盐 来 进 行 冻 干 处 理 ， 因 此 微 量 的 细 胞 因 子 在 冻 干 过 程 中 会 沉 积 于 管 内 ， 形 成 很 薄 或 不 可 见 的 蛋 白 层 。 
 所 以 我 们 建 议 在 收 到 产 品 后 ， 务 必 在 开 盖 前 先 离 心 ， 使 粘 在 管 盖 或 管 壁 上 的 蛋 白 聚 集 于 管 底 （ 此 时 能 否 见 到 白 色 沉 淀 均 属 正 常 现 象 ） 。 
 1 ． 离 心 ： 高 速 离 心 （ 1 0 , 0 0 0 r p m ） 2 0 3 0 秒 ， 或 低 速 离 心 （ 2 , 0 0 0 r p m ） 5 分 钟 。 
     2 ． 溶 解 （ R e c o n s t i t u t i o n ） ： 用 去 离 子 水 或 其 它 缓 冲 液 （ 根 据 说 明 书 要 求 进 行 选 择 ） 溶 解 至 说 明 书 要 求 的 浓 度 （ 一 般 为 0 . 1 1 . 0 m g / m L ， 如 1 0 u g 的 产 品 ， 需 用 1 0 u L 1 0 0 u L 的 去 离 子 水 或 缓 冲 液 溶 解 ） 。 
 溶 解 时 不 可 振 荡 ， 避 免 因 化 学 键 的 断 裂 造 成 蛋 白 失 活 ， 可 加 入 适 当 的 溶 剂 轻 摇 并 静 置 一 段 时 间 ， 待 细 胞 因 子 完 全 溶 解 后 使 用 。 
 溶 剂 的 选 择 ：     1 ） 要 求 用 去 离 子 水 溶 解 的 产 品 ， 务 必 不 可 用 盐 溶 液 ， 避 免 过 高 的 盐 浓 度 造 成 蛋 白 不 可 逆 的 析 出 ；     2 ） 要 求 用 盐 溶 液 溶 解 的 产 品 ， 请 依 照 说 明 书 上 的 浓 度 ， 同 样 也 是 为 了 避 免 过 高 的 盐 浓 度 。 
     3 ． 分 装 和 贮 存 （ A l i q u o t a n d S t o r a g e ） ： 蛋 白 溶 解 后 可 根 据 自 己 的 实 验 需 要 进 一 步 稀 释 成 工 作 液 ， 稀 释 可 用 R P M I 1 6 4 0 、 D M E M 或 P B S 等 溶 液 ， 其 中 应 该 含 有 5 1 0 % 的 F C S （ 小 牛 血 清 或 胎 牛 血 清 ） 或 0 . 5 % 的 B S A （ 牛 血 清 白 蛋 白 ） 来 稳 定 蛋 白 。 
 工 作 液 在 4 ℃ 可 保 存 1 周 ， 如 需 长 期 保 存 ， 则 需 分 装 冻 存 于 2 0 ℃ （ 注 意 ： 不 可 冻 存 于 8 0 ℃ ） 。 
 分 装 时 每 管 中 工 作 液 的 体 积 应 该 是 一 次 实 验 的 用 量 ， 以 实 现 每 次 实 验 用 完 一 只 工 作 液 ， 避 免 反 复 冻 融 引 起 蛋 白 活 性 的 降 低 。 
 公 司 新 闻 技 术 中 心 【 重 要 】 关 于 酶 免 L O G O 变 更 通 知 2 0 2 2 0 7 1 5 喜 迎 国 庆 | 2 0 2 4 年 酶 免 国 庆 节 放 假 通 知 2 0 2 4 0 9 2 4 “ 酶 免 ” 品 牌 E L I S A 试 剂 盒 打 假 声 明 2 0 2 0 0 5 2 7 关 于 酶 免 E L I S A 试 剂 盒 包 装 升 级 公 告 2 0 1 8 1 0 3 0 酶 免 启 用 双 重 防 伪 通 知 ！ 2 0 1 8 1 0 2 4 E L I S A 试 剂 盒 的 注 意 事 项 2 0 2 4 0 9 3 0 抗 体 和 抗 原 的 区 别 2 0 2 4 0 8 2 3 一 篇 文 章 让 你 了 解 什 么 是 E L I S A 方 法 学 2 0 2 4 0 7 3 1 关 于 我 们 更 多 > > 关 于 我 们 企 业 简 介 企 业 文 化 联 系 我 们 新 手 指 南 用 户 注 册 购 物 流 程 配 送 方 式 上 门 自 提 快 递 运 输 关 注 酶 免 公 众 号 关 注 酶 免 新 浪 微 博 支 付 方 式 在 线 支 付 货 到 付 款 公 司 转 账 售 后 服 务 售 后 政 策 换 货 政 策 取 消 订 单 售 后 服 务 会 员 政 策 会 员 积 分 积 分 兑 换 用 户 协 议 首 页 | 新 闻 资 讯 | 产 品 中 心 | 客 户 服 务 | 技 术 中 心 | 关 于 我 们 C o p y R i g h t 酶 免 试 剂 盒 商 城 w w w . m m b i o . c n . A l l R i g h t s R e s e r v e d 电 话 ： 4 0 0 7 5 0 0 2 2 0 1 5 1 8 9 2 8 5 2 5 4 邮 箱 ： m m b i o l o g y @ 1 6 3 . c o m     苏 I C P 备 1 9 0 1 7 1 2 2 号 1 在 线 客 服 负 责 区 域 ： 全 国 酶 免 客 服 热 线 : 4 0 0 7 5 0 0 2 2 0 相 关 问 题 请 咨 询 售 前 客 服 。 
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